Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
и, во-вторых, что требуется определить, выше или ниже этого порога концентрация эндотоксина в испытуемом продукте. Количественные методы С, D, E и F дают возможность определить концентрацию эндотоксина в образце, но для определения соответствия Фармакопее и при рутинном контроле качества, основной вопрос заключается в том, превышает ли эта концентрация установленный предел.
При установлении пороговой концентрации эндотоксина в испытуемом продукте следует уделять должное внимание человеческой дозе этого продукта: цель должна заключаться в том, чтобы гарантировать, что пока концентрация эндотоксина в продукте остается ниже такого порогового значения, даже максимальная доза, вводимая указанным путем в течение часа, не будет содержать эндотоксин в количестве, достаточном для возникновения токсической реакции.
Как в случае равенства концентрации эндотоксинов в продукте пороговому значению, так и в случае значительно больших концентраций, возникает гелеоб-разование, и продукт не выдерживает испытание, ввиду того, что характер испытания «все или ничего» делает невозможным различение концентрации, в точности равной пороговой, и более высокой. Вывод о том, что концентрация эндотоксина не превышает пороговое значение, можно сделать лишь при отсутствии ге-леобразования.
Для продуктов, находящихся в твердом состоянии, такая пороговая концентрация эндотоксина на единицу массы или Международную Единицу продукта под-
лежит переводу в концентрацию эндотоксина в миллилитре испытуемого раствора, так как испытание может быть выполнено только с раствором. Случай, когда продукция уже пребывает в жидком виде (например, инфузионные жидкости), будет оговорен ниже.
Предельное содержание эндотоксинов: для активных субстанций, предназначенных для парентерального введения, определяется на основании дозы и равно:
K
M ’
где :
К - допустимая пирогенная доза эндотоксина, вводимая в течение часа на
килограмм массы тела,
М - максимальная рекомендованная доза продукта, вводимая в течение ча-
са на килограмм массы тела.
Предельное содержание эндотоксинов зависит от продукта и пути его введения и устанавливается в частных статьях. Предлагаемые значения К приведены в Таблице 2.6.14.-5.
Таблица 2.6.14.-5
Способ введения К, в МЕ эндотоксина на кг массы тела в час
Внутривенно 5,0
Внутривенно, для радиофарма- 2,5
цевтических препаратов
Интратекально 0,2
Какое разведение продукта должно быть использовано в испытании для получения максимальной уверенности в том, что отрицательный результат свидетельствует о том, что концентрация эндотоксина в продукте менее предельной, а положительный результат означает, что с помощью лизата обнаруживается концентрация, равная или превышающая предельную? Такое разведение зависит от установленного предела и от чувствительности лизата: для него применяется термин «максимально допустимое разведение» (МДР), и его значение может быть вычислено по следующей формуле:
М 4ПР Предельное содержание эндотоксинов х Концентрация испытуемого раствора
Д ~ Я ’
Концентрация испытуемого раствора:
- в мг/мл, если предельное содержание эндотоксинов выражено в массовых единицах (МЕ/мг),
- в Ед/мл, если предельное содержание эндотоксинов выражено в пересчете на единицу биологической активности (МЕ/Ед)
- в мл/мл, если предельное содержание эндотоксинов выражено в объемных единицах (МЕ/мл).
Л - чувствительность лизата в гель-тромб-методе, указанная на этикетке, или низшая точка стандартной кривой в турбидиметрических или хромогенных методах.
В случаях, когда значение максимально допустимого разведения не является целочисленным, для рутинных целей может быть использовано подходящее целое число, меньшее МДР (что означает разведение раствора продукта в степени, меньшей, чем МДР). В таком случае, отрицательный результат свидетельствует о том, что концентрация эндотоксина в продукте ниже предельного значения. Однако, когда концентрация эндотоксина в продукте в таком испытании ниже предельного значения, но достаточно высока для того, чтобы реакция с лизатом привела к образованию сгустка, испытание в таких условиях может дать положительный результат. Поэтому, когда испытание с использованием такой «удобной» степени разведения дает положительный результат, продукт следует развести до МДР и повторить испытание. В любых сомнительных или спорных случаях следует использовать МДР.
Это подчеркивает важность подтверждения чувствительности лизата.
Пример
Следует провести испытание раствора фенитоина натриевой соли концентрацией 50 мг/мл, предназначенного для внутривенного введения. МДР определяют, используя следующие значения переменных:
